轉(zhuǎn)基因大麥的gfp基因遺傳表達及整合位點結(jié)構(gòu).pdf

1、轉(zhuǎn)基因在植物中穩(wěn)定遺傳表達是轉(zhuǎn)基因成功運用的關(guān)鍵。本實驗利用采用基因槍法獲得的轉(zhuǎn)gfp基因大麥為材料，從高度表達到不表達的4種轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白基因(gfp)大麥，分別編碼為F、C、A和D(D為轉(zhuǎn)基因沉默株系)，通過熒光原位雜交明確了gfp在4種不同表達水平轉(zhuǎn)基因大麥中的染色體上的插入位置：4個株系的gfp在7號染色體的不同位置都有一個插入位點，F(xiàn)則在5號染色體還有另外一個插入位點。gfp的不同插入位置使得其的表達量有差異，這體現(xiàn)了gfp轉(zhuǎn)

2、基因的位置效應(yīng)。 不同轉(zhuǎn)基因植株間進行有性雜交，即F與A、C、D和CK(未轉(zhuǎn)gfp基因的大麥)進行正反交。對親本、F1和F2代植株的根尖和花粉熒光進行測量，結(jié)果表明：4對正反交植株的根尖與花粉熒光表達一致，表明轉(zhuǎn)基因(gfp)是完全核遺傳。8個組合中有6個組合的根尖、花粉是可以穩(wěn)定遺傳的，并符合兩個獨立位點(基因)的分離比，而有2個組合表現(xiàn)出不穩(wěn)定遺傳現(xiàn)象。 對其中的兩個gfp表達量差異較大的轉(zhuǎn)基因株系(D和F)進行So

3、utllem B10t分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)它們都有一條與轉(zhuǎn)化質(zhì)粒相近的帶，表明它們都由多拷貝的質(zhì)粒頭尾串聯(lián)整合而成。另外，還對D和F株系進行質(zhì)粒拯救法分析，不同單酶切后連接，分別都獲得了多個拯救質(zhì)粒，電泳結(jié)果表明它們都一樣大小；PCR鑒定它們都含有g(shù)fp基因。測序分析表明，幾個營救質(zhì)粒中除個別發(fā)生截短現(xiàn)象，其他營救質(zhì)粒都與轉(zhuǎn)化質(zhì)粒大小一致，序列比對也完全一致，這也進一步說明了轉(zhuǎn)化質(zhì)粒在植株D和F的基因組中是以頭尾相串聯(lián)的方式進行整合的，確切的