TNF-α，G-CSF及VEGF對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞表面黏附分子L-選擇素和血管細胞黏附分子-1表達影響的研究.pdf

1、目的：研究大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cell，MSCs)經(jīng)不同濃度的腫瘤壞死因子-a(tumor necrosis factor alpha，TNF-a)、粒細胞集落刺激因子(granulocyte-colony-stimulating factor，G-CSF)及血管內(nèi)皮細胞生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)預(yù)處理后不同時間段

2、，其表面黏附分子L-選擇素(L-selectin，CD62L)和血管細胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1，CD106)的表達的變化，以及其表達變化與細胞因子濃度之間的關(guān)系，從而為經(jīng)細胞因子預(yù)處理的MSCs用于移植治療心力衰竭提供一個最佳的細胞因子濃度，為提高移植成功率打下基礎(chǔ)。 方法： 1．大鼠MSCs的培養(yǎng)：采用密度梯度離心法收集大鼠MSCs并用貼壁培養(yǎng)法對

3、其進行擴增和純化。 2．大鼠MSCs的鑒定：采用免疫組化的方法進行細胞鑒定。 3．細胞因子預(yù)處理：于不同孔板細胞中加入不同濃度TNF-a(濃度分別為100pg/ml、1ng/ml和10ng/ml)、G-CSF(濃度分別為1ng/ml、10ng/ml和100ng/ml)和VEGF(濃度分別為 1ng/ml、10ng/ml和100ng/ml)分別作用12小時和24小時。 4．大鼠MSCs的消化分離以及標記：將貼壁生長

4、的大鼠MSCs經(jīng)消化后加入PBS溶液進行洗滌離心，收集細胞，使之成為單細胞懸液，后加入熒光標記的流式抗體，于暗箱孵育三十分鐘。 5．數(shù)據(jù)記錄：采用流式細胞儀(flow cytometer，F(xiàn)CM)對大鼠MSCs表面的黏附分子CD62L和CD106的表達進行檢測。 結(jié)果： 1．培養(yǎng)的大鼠MSCs呈成纖維細胞樣表型，貼壁生長，經(jīng)擴增傳代后細胞呈紡錘樣，分布均勻，其余血細胞幾乎消失，經(jīng)免疫細胞化學(xué)法鑒定CD44和CD9

5、0呈陽性，CD45和CD34呈陰性，為大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞。 2．經(jīng)TNF-a預(yù)處理12小時的大鼠MSCs經(jīng)流式細胞儀檢測其表面CD62L和CD106均成陽性表達的細胞占所檢測細胞的百分比與未加入任何細胞因子預(yù)處理的空白組大鼠MSCs相比較，當TNF-a濃度分別為100pg/ml時，1ng/ml時，10ng/ml時，與空白組比較P=0.029(P<0.05)，不同濃度組間比較P=0.007(P<0.01)；而作用24小時后其CD

6、62L，CD106的雙陽性表達率在濃度分別為100pg/ml，1ng/ml， 10ng/ml時，與空白組比較P=0.029(P<0.05)，不同濃度組間比較P=0.007(P<0.01)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。 3．用G-CSF預(yù)處理12小時的大鼠MSCs其表面CD62L和CD106雙陽性表達百分比在其濃度分別為1ng/ml，10ng/ml和100ng/ml時表面CD62L和CD106雙陽性表達百分比與空白組相比P=0.029(P

7、<0.05)；處理24小時后其表面CD62L，CD106雙陽性表達率與空白組相比P=0.029(P<0.05)；不同濃度組間比較P=0.007(P<0.01)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。 4．用VEGF預(yù)處理12小時的大鼠MSCs表面CD62L和CD106雙陽性表達百分比在濃度為1ng/ml時，與空白組比較P=(P>0.05)，10ng/ml時表面CD62L和CD106雙陽性表達百分比與空白組比較P=0.886(P>0.05)，在濃度

8、為100ng/ml時表面CD62L和CD106雙陽性表達百分比與空白組比較P=1(P>0.05)；處理24小時后，各濃度組表面CD62L，CD106的雙陽性表達率與空白組相比較，其P值分別為0.486(P>0.05)，1(P>0.05)和0.886(P>0.05)，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。不同濃度組間P=0.926(P>0.05)，也無統(tǒng)計學(xué)意義． 5．12小時和24小時兩個預(yù)處理時間點之間相比較．P>0.05，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。