枸杞多糖對海馬神經元氧糖剝奪再灌注損傷的保護作用及對PARP-1-AIF介導的細胞凋亡途徑的抑制研究.pdf

1、目的：觀察枸杞多糖(lycium barbarumpolysaccharide,LBP)對原代培養(yǎng)的新生大鼠海馬神經元氧糖剝奪再灌注損傷的保護作用，并探討其作用機制與抗凋亡的關系。
　　方法：1.以原代培養(yǎng)的新生大鼠海馬神經元為研究對象，用無糖培養(yǎng)液結合物理性缺氧建立氧糖剝奪再灌注損傷模型；通過神經元特異性烯醇化酶熒光染色，鑒定神經細胞。
　　2.MTT酶反應法測定神經細胞存活率，化學比色法測定神經細胞乳酸脫氫酶(LDH)漏

2、出率以及NAD含量的變化。
　　3.應用Hoechst33342染色法、AnnexinV-FITC/PI法檢測原代培養(yǎng)的新生大鼠海馬神經細胞的凋亡。
　　4.使用激光共聚焦技術測定神經細胞內游離鈣離子含量以及線粒體膜電位（Mitochondrial membrane potential，MMP）水平的變化。
　　5.使用瓊脂糖凝膠電泳法檢測DNA Ladder。
　　6.免疫蛋白印跡技術和實時熒光定量PCR技術檢

3、測凋亡相關因子PARP-1，AIF和Endo G的蛋白和mRNA的表達。
　　結果：1.與正常組比較，模型組可顯著提高LDH的漏出率(P<0.01)，降低神經細胞的存活率(P<0.01)以及NAD的含量（P<0.001）；與模型組比較，枸杞多糖治療組(10、20、40 mg/L)可顯著降低LDH的漏出率(P<0.05，P<0.01)，提高海馬神經細胞的存活率(P<0.01)以及NAD的含量（P<0.01，P<0.001）。

4、　　2.與正常組比較,Hoechst33342和AnnexinV-FITC/PI法檢測顯示神經細胞凋亡率明顯升高(P<0.001)；與模型組比較，枸杞多糖治療組(10、20、40mg/L)可顯著降低神經細胞的凋亡率(P<0.01，P<0.001)。
　　3.與正常組比較，模型組可顯著提高海馬神經細胞內游離鈣離子的含量(P<0.01)，降低線粒體膜電位的熒光值(P<0.01)；與模型組比較，枸杞多糖治療組(10、20、40mg/L)

5、可顯著降低海馬神經元內游離鈣離子的含量(P<0.05，P<0.01)，穩(wěn)定線粒體膜電位(P<0.01)。
　　4.與正常組比較，模型組出現(xiàn)大量的DNA斷裂片段；與模型組相比，枸杞多糖治療組(10、20、40mg/L)對DNA梯度有不同程度的緩解。
　　5.與正常組比較，模型組中大鼠海馬神經細胞PARP-1和AIF的蛋白水平明顯上調，而Endo G蛋白水平明顯下調，有顯著性差異(P<0.001，P<0.001，P<0.01)；

6、與模型組比較，枸杞多糖治療組(40mg/L)可明顯抑制PARP-1(P<0.001)和AIF(P<0.01)蛋白表達，增強Endo G蛋白的表達(P<0.05)。
　　6.與正常組比較，模型組中大鼠海馬神經元PARP-1、AIF和Endo G的mRNA水平明顯上調，有顯著性差異(P<0.001，P<0.01，P<0.01)；與模型組比較，枸杞多糖治療組(40mg/L)可明顯抑制PARP-1(P<0.01)，AIF(P<0.05)和