脾臟樹突狀細胞在MODS病程中遷移變化的研究.pdf

1、目的：觀察小鼠脾臟樹突狀細胞(dendritic cell，DC)在多器官功能障礙綜合征(Mul-tiple organs dysfunction syndrome，MODS)分布位置的變化，檢測脾臟DC功能相關的表面分子和趨化因子受體-7在MODS病程中的變化規(guī)律與意義。探討脾臟13(2在免疫紊亂、過度炎癥反應及臟器損傷機制中的影響與作用，為MODS免疫學機制與防治研究提供新的依據(jù)。方法：腹腔注射酵母多糖復制C57BL/6小鼠MODS

2、模型，實驗分組：(1)正常對照組(n=15)；(2)MODS組(n=60)：3-6小時組、24-48小時組、5-7日組和10-12日組。分別在設定的時間點取血和脾臟。脾臟-部分無菌、無酶液氮凍存，另一部分用于做單細胞懸液。采用免疫組化方法觀察各組小鼠脾臟DC CD11c表達情況；采用流式細胞術檢測脾臟DC細胞免疫表型(MtHC-Ⅱ和CD86)、脾臟DC表達CCR7在MODS病程中的變化、脾臟DC；在MODS病程過程中數(shù)量變化、外周血T細

3、胞亞群和外周血單核細胞MHC-Ⅱ分子表達水平；YUNEL，方法檢測在MODS病程中脾臟細胞凋亡現(xiàn)象。結(jié)果：(1)CD11c陽性細胞在正常小鼠脾臟中主要分布在邊緣區(qū)和濾泡生發(fā)中心，在白髓T細胞區(qū)和紅髓中DC分布極少；致傷早期(3-6小時)，CD11c陽性細胞主要分布白髓的T細胞區(qū)；急性損傷期(12-48小時)，CDllc陽性細胞此時主要分布在脾臟白髓；緩解期(5-7天)，CD11c陽性細胞分布較為彌散；MODS期(10-12天)，CD11

4、c陽性細胞又以脾臟邊緣區(qū)附近分布為主。(2)脾臟DC的數(shù)量在致傷后3-6小時組急劇增加，24-48小時組明顯下降，5-7天和10-12天組與正常小鼠脾臟DC數(shù)量相當。(3)在24-48小時組和10-12天組脾臟存在大量凋亡細胞(4)脾臟DC表達MHC-Ⅱ、CD86、CCR7在3-6小時和12-48小時顯著增加，10-12天組MHC-Ⅱ、CD86、CCR7表達水平明顯下降。(5)酵母多糖致傷后3-6小時組，外周血單核細胞MHC-Ⅱ分子和C

5、D4+T細胞含量下降而CD8+T細胞含量增加，CD4+/CD8+比值降低；致傷后24-48小時組，外周血單核細胞MHC-Ⅱ分子和CD4+T細胞繼續(xù)呈現(xiàn)下降趨勢，降至最低點，CD8+T細胞含量也減少，CIM+/CD8+比值降低；致傷后5-7天組，外周血單核細胞MHC-Ⅱ分子有所恢復，CIM+T細胞增加，CD4+/CD8+比值回升，但仍低于正常組；致傷后10-12天組，外周血單核細胞MHC-Ⅱ分子和CD4+T細胞數(shù)目再度明顯減少。而CD8+

6、T細胞數(shù)目明顯增高，CD4+/CD8+比值倒置，較正常組明顯下降。結(jié)論：1、脾臟DC在MODS病程早期由脾臟邊緣區(qū)向白髓發(fā)生遷移，并在遷移過程中不斷快速成熟，導致了機體失控性炎癥反應；晚期DC以不成熟狀態(tài)滯留在邊緣區(qū)附近，此時機體處于免疫抑制狀態(tài)。2、CCR7可能是影響MODS小鼠脾臟樹突狀細胞遷移活性和免疫功能的一個重要因素。MODS病程中脾臟DC CCR7表達水平可以作為評估其遷移活性和小鼠機體細胞免疫應答水平的一個指標，CCR7表