穩(wěn)定表達HPPE基因的HEK293細胞對骨癌痛大鼠鎮(zhèn)痛作用及對PKCγ的影響.pdf

1、目的：建立大鼠骨癌痛模型并鞘內置管，觀察鞘內注射穩(wěn)定表達人前腦啡肽原(HPPE)基因的HEK293細胞(Plv-Ubc-HPPE/HEK293)對骨癌痛大鼠痛覺的影響，探討其與脊髓背角蛋白激酶Cγ（PKCγ）表達的關系。
　　 方法：選取40只健康雌性SD大鼠（體重180-200克），隨機分為4組(n=10):Naive組（空白對照，大鼠不做任何處理），BCP組（大鼠左側脛骨行骨癌痛造模手術，鞘內不注入藥物），BCP+HEK29

2、3組（大鼠左側脛骨行骨癌痛造模手術，鞘內注入Ubc-GFP-L.V/HEK293細胞），BCP+HPPE組（大鼠左側脛骨行骨癌痛造模手術，鞘內注入Plv-Ubc-HPPE/HEK293細胞）。對造模成功大鼠進行鞘內穿刺并留置導管。術后第14天開始分別對BCP+HEK293組和BCP+HPPE組大鼠鞘內注射Ubc-GFP-L.V/HEK293細胞懸液和Plv-Ubc-HPPE/HEK293細胞懸液各10μl，每天一次，連續(xù)四天。術前1天和

3、從術后3天開始每隔三天測定各組大鼠的熱刺激縮足反射潛伏期(Paw withdrawal thermal latency,PWTL)。術后18天取各組大鼠L4-L6脊髓組織，使用免疫組織化學法檢測大鼠脊髓背角PKCγ的表達。
　　 結果：1）在骨癌痛模型制作前，各組大鼠PWTL無顯著差異（P＞0.05）。2）在骨癌痛模型制作第9天開始，疼痛導致大鼠PWTL較術前顯著降低(P＜0.05)，并持續(xù)下降，與同時間Naive組比較也有統計

4、學差異（P＜0.05）。3）鞘內注射細胞后，BCP+HEK293組大鼠PWTL仍繼續(xù)降低(P＜0.05)，與BCP組比較無統計學差異(P＞0.05)。BCP+HPPE組大鼠PWTL則較BCP組和BCP+HEK293組明顯升高(P＜0.05)。4)免疫組織化學結果顯示：Naive組大鼠腰膨大處(L4-L6)可見PKCγ少量表達，且陽性細胞染色較淺。BCP組和BCP+HEK293組大鼠脊髓背角PKCγ蛋白表達量較Naive組明顯增加，差別有

5、統計學意義(P＜0.05)。BCP+HPPE組大鼠在鞘內注射Plv-Ubc-HPPE/HEK293細胞后脊髓背角PKCγ的蛋白表達量顯著降低，與BCP組和BCP+HEK293組比較差別有統計學意義（P＜0.05）。
　　 結論：1）大鼠行為學表現表明大鼠左側脛骨骨癌痛模型成功建立。2）大鼠蛛網膜下腔移植穩(wěn)定表達HPPE基因的Plv-Ubc-HPPE/HEK293細胞，可以較好的減輕骨癌痛大鼠的行為學變化，抑制疼痛過敏反應，能起到