炎癥介質對腎小管上皮細胞中PPARγ和輔調節(jié)因子表達的影響及機制.pdf

1、過氧化物酶體增殖物激活受體（PPARs）是一類配體激活的核轉錄因子超家族成員之一。由于PPARs參與調節(jié)多種生理功能，如脂肪細胞分化、炎癥反應、脂肪酸及脂類代謝、細胞周期和凋亡等，因而成為近年來國內外研究的熱點之一。PPARs在腎臟組織和細胞中廣泛表達。PPARγ是PPARs的重要的表型之一，已經證實PPARγ及其激動劑在一些腎臟疾病，如腎小球硬化、腎小球腎炎、腎小管間質炎癥和腎臟微血管病變中發(fā)揮重要的調節(jié)作用。本研究以TNF-α和IL

2、-1b為刺激劑，以人近端腎小管上皮細胞（HK-2細胞）為研究對象，利用Real-time PCR法、Western Blot法、EMSA法及ELISA法觀察炎癥反應狀態(tài)下，NF-κB、PPARγ、輔調節(jié)因子以及趨化因子的表達變化特點，探討它們與炎癥發(fā)展過程之間存在的關系。主要內容如下： 第一部分：研究發(fā)現(xiàn)不同濃度的TNF-α作用于HK-2細胞24小時后，MCP-1的mRNA表達水平隨著刺激濃度的遞增呈顯著上調趨勢。TNF-α（1

3、0ng/ml）刺激HK-2細胞0.5h時MCP-1的mRNA水平即出現(xiàn)顯著上調（P<0.05），4h時達到高峰（約為對照組的11倍，P<0.01），之后逐漸下降，至8h時仍然高于正常（P<0.05）。ELISA法檢測發(fā)現(xiàn)，TNF-α（10ng/ml）作用于HK-2細胞后，MCP-1的蛋白分泌水平持續(xù)增高，至24h達到最高值，由基礎水平時的15.52±1.05pg/ml升至40.5±0.97 pg/ml（P<0.05）。IL-1?

4、（10ng/ml）也可誘導MCP-1的分泌水平持續(xù)增高，刺激8h后即達到最高值，由基礎水平時的19.33±2.33pg/ml升至160.56±2.8 pg/ml（P<0.01），之后緩慢下降，至24小時仍為50.82±1.25pg/ml（P<0.05）。上述結果表明TNF-α和IL-1b具有較強的致炎效應。 第二部分：研究發(fā)現(xiàn)TNF-α和IL-1?作用于HK-2細胞24h后，PPARγ mRNA表達水平隨著刺激濃度的增高均呈顯著

5、下調趨勢。在時間梯度實驗中發(fā)現(xiàn)，隨著TNF-α和IL-1?（10ng/ml）刺激時間的延長，HK-2細胞中PPARγ mRNA和蛋白質表達水平也均呈顯著下調趨勢。利用同批核蛋白進行EMSA檢測的結果顯示，隨著兩者刺激時間的延長，PPARγ的DNA結合活性呈總體減弱趨勢，至24h達到最低；NF-κB的活性均呈總體增強趨勢，至24h達到高峰。這些結果表明，TNF-α和IL-1介導的炎癥刺激均可以引起腎小管上皮細胞中的PPARγ mRNA和蛋

6、白質表達水平下降，同時引起PPARγ的DNA結合活性下降，而NF-κB－一種在炎癥信號轉導中起發(fā)揮關鍵作用的轉錄因子的活性增強。 第三部分：的結果顯示不同濃度的TNF-α和IL-1?刺激24h后，輔激活因子SRC-1、SRC-2、SRC-3和PGC-1隨著刺激濃度的增高均呈現(xiàn)顯著下調趨勢(P<0.05)，而輔抑制因子NCoR表現(xiàn)為顯著上調(P<0.05)。選擇10 ng/ml作為最佳刺激濃度，發(fā)現(xiàn)TNF-α作用不同的時間后，SR

7、C-3和PGC-1的mRNA水平在刺激1h時出現(xiàn)顯著下調，分別降低了53％和46％(P<0.01)；SRC-1和SRC-2的mRNA水平在刺激2h后出現(xiàn)顯著下調，分別降低了35％和41％(P<0.05)； NCoR則在刺激16h后出現(xiàn)顯著上調（約為對照組的2.16倍，P<0.01）。而10 ng/ml的IL-1?作用不同的時間后發(fā)現(xiàn)SRC-2和PGC-1的mRNA水平在刺激1h后分別顯著下調了57％(P<0.01)和48％(P<0.01