T35s啟動子的植物表達載體構建及vp-,4-——st融合基因在苜蓿中的表達.pdf

1、本研根據(jù)已發(fā)表的文獻，啟動子的串聯(lián)能增強外源基因的表達，改造花椰菜病毒的35S啟動子，將質粒pBLG雙35S啟動子雙酶切切下，連接到克隆載體pUC18上進行測序，經(jīng)序列分析后將此雙35S啟動子連接到克隆載體pJIT60上，與pJIT60上本身含有的雙35S啟動子串聯(lián)連接，構建一個含兩個A區(qū)，四個B區(qū)T35S，并將T35S啟動子連接到克隆載體pUC18上進行測序，經(jīng)序列分析后，通過酶切、連接、轉化將T35S啟動子連接到植物表達載體pBLG

2、vp4-st上，構建了植物表達載體pBLGT35Svp4-st。利用農(nóng)桿菌介導法，將植物表達載體pBLGT35Svp4-st和pBLGvp4-st轉化苜蓿，經(jīng)卡那霉素(Kan)多重篩選，獲得抗性植株。 結果：T35S經(jīng)序列分析后，T35S啟動子兩個A區(qū)同源率達到83.50％，四個B區(qū)同源率為80.31％。對植物表達載體pBLGT35Svp4-st進行BamHI和SacⅠ雙酶切鑒定，可切下一大小約1491bp的目的條帶，與理論值一