山羊zfp36基因的克隆、表達(dá)及組織表達(dá)譜研究.pdf

1、鋅指蛋白基因zfp36是一類具有手指狀結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子,在基因表達(dá)調(diào)控、細(xì)胞分化、胚胎發(fā)育、增強(qiáng)植物抗逆性等方面具有重要的作用,該基因在小鼠和人與關(guān)節(jié)炎、自身免疫疾病、骨質(zhì)增生等綜合癥相關(guān)。但是目前有關(guān)山羊zfp36基因的研究未見報(bào)道。對山羊zfp36基因進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析、探討其變異情況及種群特異性,研究該基因的組織表達(dá)差異,可為今后進(jìn)一步開展該基因功能研究奠定基礎(chǔ)。
　　 本研究運(yùn)用RT-PCR方法克隆了山羊zfp36基因的編碼區(qū)

2、序列;運(yùn)用Bioedit、BLAST、SMART、ProtParam、SCOPMA等在線工具和軟件,對山羊zfp36基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析;結(jié)果顯示,山羊zfp36基因的編碼區(qū)長度為978bp,編碼325個氨基酸;同源比對發(fā)現(xiàn)山羊zfp36基因與人類、豬、牛、綿羊和大鼠的核苷酸序列一致性分別達(dá)到86％、89%、98%、99%、82%。以濟(jì)寧青山羊、雷州黑山羊、南江黃羊、遼寧絨山羊?yàn)檠芯繉ο?運(yùn)用PCR-SSCP方法檢測其品種問多態(tài)性,并

3、探討不同基因型在品種間的分布規(guī)律;結(jié)果顯示在外顯子未發(fā)現(xiàn)SNPs,在內(nèi)含子上檢測到了一個SNPs位點(diǎn),為A/T堿基置換,群體遺傳學(xué)分析表明其突變頻率分布具有品種特異性。通過構(gòu)建zfp36基因編碼區(qū)的重組原核表達(dá)載體pet30-a-zfp36,并對表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化,利用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測出成功表達(dá)的山羊ZFP36蛋白。運(yùn)用實(shí)時定量RT-PCR方法研究了山羊zfp36基因在心、肝、脾、肺、腎、腦、腸、胃8個組織中的表達(dá)情況,結(jié)果顯示,z