仁用杏資源的SSR遺傳多樣性評(píng)價(jià).pdf

1、仁用杏為我國(guó)北方特有的經(jīng)濟(jì)果樹(shù),種質(zhì)資源豐富,但因研究力度不足,其遺傳背景和親緣關(guān)系尚不明。本研究從分子水平上對(duì)我國(guó)主要栽培種植的仁用杏資源進(jìn)行SSR分析,研究仁用杏品種、類(lèi)型之間的親緣關(guān)系,以期為仁用杏遺傳育種和核心種質(zhì)保存提供科學(xué)依據(jù)。
　　 本研究結(jié)合正交試驗(yàn)和單因素分析,確定了仁用杏SSR-PCR最佳體系:20μL反應(yīng)體系中,Mg2+1.5 mmol/L、dNTPs0.2 mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5 U、引

2、物0.25μmol/L。選擇與仁用杏近緣的物種(桃、杏)中開(kāi)發(fā)的22對(duì)SSR引物,用兩份DNA樣本進(jìn)行篩選,除3對(duì)引物外,其余的19對(duì)引物均能擴(kuò)增出清晰的譜帶。
　　 19對(duì)引物PCR產(chǎn)物經(jīng)2％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),由于目的譜帶間分子量大小差別小,不能進(jìn)行分辨；進(jìn)一步采用聚丙烯酰胺凝膠電泳,可清晰地顯示出不同樣本間譜帶的差異。故可采用SSR擴(kuò)增產(chǎn)物的聚丙烯酰胺電泳譜帶分析揭示仁用杏SSR遺傳多樣性。對(duì)非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳條件優(yōu)

3、化的結(jié)果如下:膠濃度為6％(丙烯酰胺/甲叉雙丙烯酰胺質(zhì)量比29:1),27次循環(huán)的PCR產(chǎn)物上樣量1～2μL/孔,1000V電泳2 h。進(jìn)一步基于SSR-PAGE分析要求(目的條帶明亮),舍去了主帶模糊或無(wú)多態(tài)性的7對(duì)引物。
　　 12對(duì)多態(tài)性SSR引物在25份仁用杏和3份鮮食杏中共擴(kuò)增到101條多態(tài)性的譜帶,即101個(gè)等位基因,平均每個(gè)位點(diǎn)8.417個(gè)；采用Popgene軟件進(jìn)行多樣性指數(shù)分析,多態(tài)信息含量為0.4546～0.

4、8645,12個(gè)位點(diǎn)中的11個(gè)位點(diǎn)PIC都大于0.5,說(shuō)明所選的標(biāo)記具有豐富的多態(tài)性,能夠在分子水平上準(zhǔn)確反映各品種或類(lèi)型間的遺傳關(guān)系；不同位點(diǎn)的期望雜合度和觀察雜合度的差值為0.0318～0.3884,差異較小,進(jìn)一步說(shuō)明所選的微衛(wèi)星標(biāo)記是合理的,用這些標(biāo)記可以較準(zhǔn)確地分析仁用杏的遺傳結(jié)構(gòu)。
　　 12對(duì)引物基本可以將供試的25份仁用杏和3份食用杏個(gè)體區(qū)分開(kāi)。采用NTSYSpc2.11的UPGMA法對(duì)SSR結(jié)果進(jìn)行SAHN聚類(lèi)