小菜蛾泛素基因克隆、表達(dá)及功能分析.pdf

1、小菜蛾P(guān)lutella xylostella(L.)屬鱗翅目菜蛾科，是十字花科蔬菜的主要害蟲之一。由于在生產(chǎn)上用藥頻繁，加之小菜蛾生活史的特殊性，它對(duì)多種殺蟲劑都產(chǎn)生了抗藥性，已成為世界上最難防治的害蟲之一，所以對(duì)小菜蛾的抗性機(jī)理研究就顯得尤為重要。
　　 Cheng L G.等采用改進(jìn)的cDNA 代表性差異分析法(RDA）篩選出了小菜蛾抗藥性品系和敏感品系間的差異性表達(dá)片斷。其中1個(gè)序列與已知泛素基因有較高同源性。為了進(jìn)一步研

2、究泛素基因與小菜蛾抗藥性形成之間的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)克隆了小菜蛾P(guān)lutella xylostella（L.）抗溴氰菊酯品系和敏感品系的雌雄成蟲基因組中分別克隆了泛素基因的編碼區(qū)，并利用熒光定量PCR和western blot技術(shù)分析不同品系小菜蛾泛素基因的表達(dá)情況。主要研究結(jié)果如下：
　　 1. 設(shè)計(jì)一對(duì)簡并引物，從小菜蛾P(guān)lutella xylostella（L.）抗溴氰菊酯品系和敏感品系的雌雄成蟲基因組中分別克隆了泛素基因的編碼

3、區(qū)，GenBank 登錄號(hào)分別為EU28778，EU28779，EU28780，EU28781。序列分析表明，該基因的長度為228bp，編碼的多肽由76個(gè)氨基酸組成。不同品系和不同性別的小菜蛾泛素基因的核苷酸序列、氨基酸序列等均存在差異，其中敏感品系雌雄成蟲間差異較大，序列相似性為81.1％；抗性品系雌雄成蟲間差異較小，序列相似性為97.8％。推測(cè)這些差異可能與小菜蛾抗藥性的形成有關(guān)。
　　 2.為進(jìn)一步研究泛素基因與小菜蛾抗藥

4、性形成之間的關(guān)系，從小菜蛾P(guān)lutella xylostella（L.）抗溴氰菊酯品系和敏感品系的雌雄成蟲mRNA 中克隆泛素基因表達(dá)片段，GenBank 登陸號(hào)分別為：EU860162，EU860163，EU860164和 EU860165。利用熒光定量PCR 技術(shù)分析不同品系小菜蛾泛素基因的表達(dá)情況，表達(dá)量從高到低的順序依次為：敏感品系雌性樣本（SF）、敏感品系雄性樣本（SM）、抗溴氰菊酯品系雌性樣本（DRF）、抗溴氰菊酯品系雄性樣