出芽短梗霉的誘變選育及丙二酸抗性篩選聚蘋果酸高產菌-畢業(yè)論文

1、1出芽短梗霉的誘變選育及丙二酸抗性篩選聚蘋果酸高產菌出芽短梗霉的誘變選育及丙二酸抗性篩選聚蘋果酸高產菌摘要：目的摘要：目的：以出芽短梗霉（A.pullulans）AH2為出發(fā)菌株，經紫外誘變和丙二酸抗性篩選獲得聚蘋果酸高產菌株。方法方法：以AH2為起始菌種，經制霉菌素預處理，改變了出芽短梗霉細胞膜的通透性，再經紫外線誘變后進行丙二酸抗性篩選，然后經溴鉀酚綠初篩，根據(jù)篩選培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)特征以及HC值的大小，選出用于發(fā)酵的菌株，最后對發(fā)

2、酵產生的聚蘋果酸進行定量測定，篩選獲得PMA高產菌株。結果結果：最終獲得一株出芽短梗霉高產菌株丙554，其搖瓶發(fā)酵產量達到了20.80gL，比出發(fā)菌株提高了6%且高產特性穩(wěn)定。結論結論：對丙二酸耐受的出芽短梗霉菌株可以高產聚蘋果酸，此種選育方法克服了隨機篩選的盲目性，提高了菌種篩選的效率。關鍵詞：關鍵詞：聚蘋果酸；PMA高產菌株；溴鉀酚綠初篩；紫外誘變；丙二酸抗性篩選；出芽短梗霉Screeningofhighpolymalicacidm

3、utantofAureobasidiumpullulansagainstmalonicacidofSuccinodehydrogenaseInhibitAbstract：ObjectiveStartingfromtheAH2bymutagenesisscreeningtoobtainpolymalicacidproductionbyAureobasidiumpullulansstrains.MethodsTakingAH2asthest

4、artingstrainthroughnystatinpretreatmentchangedbyAureobasidiumcellmembranepermeabilityafterUVmutagenesisofmalonicacidresistancescreeningthenbypotassiumbrominephenolfirstgreenscreenaccdingtotheionofculturebasedonthempholog

5、icalacteristicsofthecolonytheHCvaluestrainsffermentation.AttheendoffermentationtoproducepolymalicacidwasquantitativelydeterminedscreenedtoobtainhighyieldstrainsofPMA.ResultsFinallyapolymalicacidhighyieldstrain554wasobtai

6、neditsshakeflaskfermentationproductionreached20.80gLtheyieldwasincreasedby6%comparedwiththestartingstrainAH2theyieldwasstable.ConclusionAureobasidiumpullulansofmalonicacidtolerancecanproducehigheryieldofpolymalicacidbyfe

7、rmentation.Thismethodovercametheblindnessofromscreeningimprovethe3聚蘋果酸有α、β、γ等3種結構，其中βPMA在自然界廣泛存在，用途也最為廣泛，微生物發(fā)酵所得均為β型[2]。蘋果酸和聚蘋果酸的結構如圖1所示[3]。圖1蘋果酸與3種聚蘋果酸的結構Fig.1Structureofmalicacidpoly(malicacid)s聚蘋果酸可降解生成蘋果酸單體其中L蘋果酸是生物體

8、內三羧酸循環(huán)(TCA)的中間體可參與代謝活動而被生物體吸收。此外對聚蘋果酸的側鏈COOH進行修飾或改性引入功能基團或藥物分子從而提高藥效和降低毒性。聚蘋果酸的諸多優(yōu)點使其在藥物載體和生物材料等領域獲得重要的應用在諸如手術縫合線、藥物控制釋放體系、組織工程支架材料及食品包裝材料等方面有著廣闊的應用前景[4]。1.3聚蘋果酸的合成現(xiàn)狀聚蘋果酸的合成現(xiàn)狀聚蘋果酸的生產方法主要分為微生物發(fā)酵法與化學合成法，化學合成法多以β烷氧羰基丙內酯為單體，

9、在引發(fā)劑的條件下，通過開環(huán)聚合得到，成本相對較高[5]?；瘜W合成法得到的產物分子量低約為2～4kDa不具備實際的應用價值；且催化劑有毒性副產物較多產物分離較困難并且合成步驟冗長提純工藝復雜收率低(＜20﹪)合成成本很高嚴重制約了其規(guī)模化生產。與化學合成法相比生物合成法得到的β聚蘋果酸分子量高可達200～760kDa；所需的原料簡單易得反應條件溫和產物較純近年來受到普遍的重視；但目前存在聚蘋果酸的發(fā)酵產量低的缺點距離聚蘋果酸工業(yè)化生產的要