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文檔簡介
1、在過去的三十年中,基因治療在治療人類疾病,如癌癥、病毒感染、艾滋病和心血管疾病等方面表現出了出巨大的潛能?;蛑委煹碾y點在于構建低毒、高效和靶向的基因載體,目前基因載體的研究對象主要包括病毒載體和非病毒載體。非病毒載體相對于病毒載體而言具有較低細胞免疫反應以及易制備、低成本和易檢驗等優(yōu)點而引起廣泛重視。作為非病毒載體的之一的陽離子脂質體更是研究的熱點。
本論文合成了兩個系列的葡萄糖類陽離子脂質體。一類脂質體疏水鏈與糖環(huán)相連,以
2、葡萄糖為原料,通過全乙?;?、脫1-O-乙?;?、施密特反應、糖苷化、疊氮化、脫全部乙?;?、4,6-O-異丙叉基保護、威廉姆森醚化、脫叉基保護、還原氨化和季銨鹽化反應,合成不同長度疏水鏈的葡萄糖衍生物陽離子脂質:di-C12-Glu-TMA、di-C14-Glu-TMA、di-C16-GluTMA和di-C18-Glu-TMA;另一類脂質體疏水鏈與親水頭部相連,也是以葡萄糖為原料,通過全乙?;?、脫1-O-乙?;?、三氯乙酰亞胺酯化、糖苷化、疊
3、氮化、脫全部乙?;⑦€原氨化、叔胺化和季銨鹽化反應,合成不同長度疏水鏈葡萄糖衍生物陽離子脂質:Glu-DiC12MA、GluDiC14MA、Glu-DiC16MA和Glu-DiC18MA。
將脂質體溶于水中,然后通過超聲波分散技術,形成脂質體水溶液,再與pEGFP-C3的質粒混合制成脂質體/DNA復合物。各陽離子脂質體和脂質體/DNA復合物的平均粒徑、粒徑分布以及Zeta電位都通過Zetasizer Nano ZS激光粒度儀來
4、測定。研究結果表明,單一陽離脂質體的平均粒徑在60-250nm之間,除了脂質體Glu-DiC18MA;所有陽離子脂質體的Zeta電位在25-70mv之間;最佳N/P比(最佳轉染效果時的N/P比)時的脂質體/DNA復合的平均粒徑為90-180nm,其Zeta電位在在10-40mv之間。通過原子力顯微鏡對脂質體及其DNA復合物的形態(tài)進行表征,結果表明脂質體及其DNA復合物呈微球形態(tài)。陽離子脂質體結合質粒DNA的能力通過凝膠電泳實驗探究。實驗
5、現象表明,DNA在凝膠中的滯留作用隨著脂質體/DNA摩爾比(即N/P比)的增加而逐漸加強,當N/P增加到3時,DNA與脂質體結合完全。
以Lipo2000商用脂質體作為陽性對照,將糖類脂質體與DNA復合后加入到HEK293細胞中,通過細胞計數檢測綠色熒光蛋白在細胞中表達狀況來判斷新型糖類脂質體的轉染效果。結果表明:與Lipo2000相比,脂質體GluDiC14MA和Glu-DiC16MA具有很好的轉染效果,脂質體di-C12-
6、Glu-TMA、di-C14-Glu-TMA和di-C16-GluTMA轉染效果較低。而脂質體di-C18-Glu-TMA、Glu-DiC12MA和Glu-DiC18MA沒有轉染效果。說明脂質體疏水鏈與季銨鹽的氮相連比疏水鏈直接與糖以醚鍵相連的脂質體轉染效果高。
以Lipo2000為陽性對照,選擇在HEK293細胞中轉染效率較高的陽離子脂質體GluDiC14MA和Glu-DiC16MA為研究對象,研究它們在Hela和HepG2
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