反義芥子酶基因轉(zhuǎn)入甘藍(lán)型油菜的研究.pdf

1、本研究利用基因工程抑制油菜體內(nèi)芥子酶基因的翻譯與表達(dá)，則得到的轉(zhuǎn)基因植株中芥子酶表達(dá)量受到抑制，并進(jìn)一步研究硫甙的降解情況和油菜的抗蟲(chóng)性品質(zhì)。 擬南芥(Arabidopsi)的芥子酶基因與甘藍(lán)型油菜芥子酶基因高度同源。本研究已得到擬南芥反義芥子酶基因載體，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將其轉(zhuǎn)入甘藍(lán)型油菜中雙6號(hào)，主要研究成果如下： 1.選擇中雙6號(hào)，浙雙3號(hào)，湘油15號(hào)，華油雜7號(hào)做再生檢測(cè)，最終選定中雙6號(hào)作為受體材料。 2

2、.對(duì)GV3101，LBA4404，EHAl05，AGL1，C58共五個(gè)農(nóng)桿菌菌種進(jìn)行抗性篩選，結(jié)合外植體組織培養(yǎng)狀態(tài)，最終確定農(nóng)桿菌GV3101作為轉(zhuǎn)化菌種。 3. 建立了油菜遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)。研究表明，取5d-6d苗齡的具柄子葉作為外植體；將OD600=0.5的農(nóng)桿菌菌液離心并收集菌體，用1/2MS液體培養(yǎng)基重懸至0.08，將具柄子葉在菌液中侵染5.10min，取出吸干多余液體并在M1培養(yǎng)基上共培養(yǎng)3d；然后在M2培養(yǎng)基上延遲培養(yǎng)

3、5d-6d；最后在添加8mg/L壯觀霉素M3培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選培養(yǎng)，直至分化出綠芽。生根培養(yǎng)基選擇MS基本培養(yǎng)基，長(zhǎng)勢(shì)良好。研究證明該轉(zhuǎn)化系統(tǒng)簡(jiǎn)單方便。 4．轉(zhuǎn)基因植株T<,0>代檢測(cè)。經(jīng)PCR擴(kuò)增，共有2個(gè)株系擴(kuò)增出目的片段，初步證明外源基因已經(jīng)整合入中雙六號(hào)油菜基因組中；提取油菜總RNA，進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)，證明外源基因已經(jīng)在油菜中得到表達(dá)。 5．T<,0>代轉(zhuǎn)基因植株抗蟲(chóng)性檢測(cè)。相比非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩仓辏琓<,0>代植