孕期糖代謝異常大鼠模型的建立及對(duì)子代糖代謝的影響.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用STZ建立類似于人類孕期糖代謝異常的大鼠模型，為進(jìn)一步研究探討與胰島素抵抗和分泌缺陷有關(guān)的妊娠期糖代謝異常的發(fā)病機(jī)制，尋找孕期有效的干預(yù)及治療方法提供理論依據(jù)，同時(shí)在此基礎(chǔ)上研究孕期糖代謝異常對(duì)子鼠的近期生長(zhǎng)和遠(yuǎn)期健康的影響，為成人疾病早期預(yù)防提供基礎(chǔ)資料。 材料和方法: 1、實(shí)驗(yàn)材料 (1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康Wistar大鼠共54只，其中雌性36只，體重230～270g；雄性18只，體重360～400g，

2、購(gòu)于中國(guó)醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心。 (2)主要試劑：STZ、檸檬酸緩沖液、血糖檢測(cè)試劑、胰島素放射免疫試劑盒等。 (3)主要儀器：血糖儀、血糖試紙條、動(dòng)物秤、722可見(jiàn)光分光度計(jì)、普通離心機(jī)、電子天平、深凍(-70℃)冰箱等。 2、實(shí)驗(yàn)方法: (1)孕期糖代謝異常大鼠模型的建立將36只’Wistar雌性大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后與18只雄鼠2：1合籠，次日清晨陰道涂片，生物顯微鏡鏡下精子陽(yáng)性定為孕第一天，懷孕雌鼠單籠

3、喂養(yǎng)。未受孕雌鼠繼續(xù)與雄鼠合籠。合籠兩周未孕的大鼠放棄。懷孕大鼠隨機(jī)分為兩組：STZ組24只，對(duì)照組大鼠7只。兩組孕鼠妊娠第五天，STZ組于禁食12h后腹腔一次性注射新配制的2％STZ溶液，劑量為40mg/kg體重；對(duì)照組同等條件下腹腔注射檸檬酸緩沖液。兩組母鼠在孕第13、16、19天，分別尾尖剪斷取血，測(cè)其空腹血糖濃度。STZ組如果三次血糖值有一次高于5.5mmol/L即為實(shí)驗(yàn)組，三次血糖均沒(méi)有高于5.5mmol/L的排除本次實(shí)驗(yàn)研究

4、。母鼠孕期每三天稱一次體重，記錄母鼠的進(jìn)食量和進(jìn)水量：懷孕大鼠所產(chǎn)仔鼠在12小時(shí)內(nèi)稱重。仔鼠的出生體重低于對(duì)照組的平均體重減去兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差為宮內(nèi)發(fā)育遲緩。仔鼠從出生到6周每三天稱重一次，6周后每周稱一次體重。3周識(shí)性別，4周斷乳，4周后雌雄分開(kāi)，2～3只一籠。喂養(yǎng)至12周。 (2)樣本采集與處理實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組仔鼠分別在生后6周、12周時(shí)，經(jīng)禁食12小時(shí)后，乙醚麻醉，剖開(kāi)腹腔，下腔靜脈取血5～10ml左右，采集的血樣在室溫靜置2小時(shí)

5、后，以3000r/min離心20分鐘，分離血清，同時(shí)取肝、腎、脾臟、胰腺稱重并記錄，將血清密封于-70℃冰箱中保存，待測(cè)。 (3)指標(biāo)的檢測(cè)方法空腹血糖(fasting blood sugar，F(xiàn)BS)測(cè)定：鄰甲苯胺法。 空腹胰島素(fasting insulin，F(xiàn)INS)測(cè)定：采用放射免疫分析方法，按胰島素放免分析試劑盒中的使用說(shuō)明進(jìn)行操作。 (4)IR判定標(biāo)準(zhǔn)穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)=FIN

6、S×FBS/22.5，反映胰島素抵抗。數(shù)值越大表明外周組織對(duì)胰島素越不敏感，胰島素抵抗越強(qiáng)。 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x士s)表示，HOMA-IR值取其自然對(duì)數(shù)使之正態(tài)化后行t檢驗(yàn)，組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)和方差分析，率的比較用x<'2>檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 1、孕期糖代謝異常大鼠模型建立在24只STZ注射孕鼠中，有12只為高血糖大鼠(實(shí)驗(yàn)

7、組)，其余12只孕鼠表現(xiàn)為正常血糖水平(放棄)。12只實(shí)驗(yàn)組大鼠有2只鼠分別在孕17天和孕21天死亡。順利生下仔鼠的有10只。因此，本實(shí)驗(yàn)孕期糖代謝異常大鼠模型的成功率為42％左右。 (1)兩組孕鼠孕期進(jìn)食量實(shí)驗(yàn)組母鼠在孕12天前與對(duì)照組比較，進(jìn)食量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，從孕15天起到分娩前實(shí)驗(yàn)組進(jìn)食量明顯高于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 (2)兩組孕鼠孕期進(jìn)水量實(shí)驗(yàn)組母鼠從孕第9天起到分娩時(shí)，進(jìn)水量

8、明顯高于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 (3)兩組孕鼠孕期體重變化孕第6天開(kāi)始到孕第20天，實(shí)驗(yàn)組母鼠體重一直低于對(duì)照組(P>0.05)；孕第20天時(shí)實(shí)驗(yàn)組母鼠體重明顯低于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 (4)兩組孕鼠孕期排尿情況通過(guò)肉眼觀察，從孕8天開(kāi)始，實(shí)驗(yàn)組孕鼠籠中的墊料幾乎每天都是全濕的，兩天就需換一次墊料；而對(duì)照組孕鼠籠中的墊料三四天都保持干爽，可以推斷出實(shí)驗(yàn)組排尿量高于對(duì)照組。 (

9、5)兩組孕鼠孕期血糖水平孕13、16、19天，實(shí)驗(yàn)組孕鼠血糖明顯高于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)，并且實(shí)驗(yàn)組母鼠隨孕期增加血糖水平有明顯增高現(xiàn)象。 2、仔鼠出生后的生存狀況及與糖代謝情況 (1)兩組仔鼠出生死胎率與宮內(nèi)發(fā)育遲緩率比較實(shí)驗(yàn)組死胎率高于對(duì)照組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；實(shí)驗(yàn)組宮內(nèi)發(fā)育遲緩的發(fā)生率顯著高于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 (2)兩組仔鼠體重變化的比較實(shí)驗(yàn)組仔鼠從出

10、生開(kāi)始到第12周，體重明顯低于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 (3)兩組仔鼠6周和12周時(shí)臟器與體重的比兩組仔鼠6周時(shí)，肝臟/體重、腎臟/體重、脾/體重和胰腺/體重之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；12周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組脾臟/體重明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，其它臟器與體重比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 3、兩組仔鼠6周和12周時(shí)FBS、FINS和HOMA．IR水平比較仔鼠出生6周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組FBS、FINS和HO