豬卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)與孤雌胚胎發(fā)育的研究.pdf

1、無論是豬卵母細(xì)胞的體外成熟培養(yǎng)還是胚胎的體外培養(yǎng)均是豬胚胎體外生產(chǎn)的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)之一，是體外受精、基因轉(zhuǎn)移及核移植技術(shù)等成功與否的前提條件。為此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)影響豬卵母細(xì)胞成熟的因素和影響豬孤雌胚胎發(fā)育的因素進(jìn)行了相關(guān)的研究，以其在本實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的條件下，獲得最適合的體外培養(yǎng)體系，為下一步的科研工作奠定基礎(chǔ)。結(jié)果如下：
　　 1 成熟液中添加0.1％PVA可以代替添加10％％FBS來使用，兩組卵母細(xì)胞的成熟率、36h的卵裂率、第6d的桑葚

2、胚率差異均不顯著(p>0.05)；在成熟液中添加不同濃度的EGF豬卵母細(xì)胞體外成熟率無顯著差異(p>0.05)，但是可以明顯的提高其卵裂率和桑葚胚率，并且以添加30ng/mL的EGF對(duì)豬孤雌胚胎的發(fā)育比較有利；ITS對(duì)于豬卵母細(xì)胞發(fā)育到桑葚胚有一定的促進(jìn)作用，但是，對(duì)卵母細(xì)胞體外成熟和卵裂又一定的抑制作用。
　　 2 胚胎培養(yǎng)液對(duì)豬孤雌胚胎的體外發(fā)育有一定的影響，在本實(shí)驗(yàn)中的三種培養(yǎng)液中，孤雌激活卵母細(xì)胞在NCSU23+0.4％

3、BSA中分裂效果較好，而mTCM199+0.1％PVA則更有利于孤雌胚胎突破4細(xì)胞阻滯達(dá)到桑葚胚；培養(yǎng)方法的改變可以影響豬孤雌胚胎的發(fā)育，在四種序貫培養(yǎng)中，NCSU23(0.4％BSA）+mTCM199(0.1％PVA)一組更適合于豬孤雌胚胎的體外培養(yǎng)。
　　 3 CO2濃度的改變對(duì)豬卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)成熟率的影響不顯著（P>0.05），而對(duì)孤雌激活后的卵裂率有較大的影響，且以CO2濃度為4％時(shí)，其卵裂率和桑葚胚率均要顯著高于(P